Метод флюоресцирующих антител, МФА (Immunofluorescence)

---

Метод флюоресцирующих антител, МФА (Immunofluorescence) основывается на реакции антигена с анти- телами, конъюгированными с флюоресцирующими красителями (флюорохромами); последние дают характерное свечение при облучении коротковолновым светом.

Считается особенно подходящим для выявления антигенов, находящихся внутри клетки.

Для медико-биологических исследований МФА впервые предложен А. Кунсом и М. Капланом в 1950 г.

Для выполнения МФА необходим препарат, содержащий комплексные молекулы антител с флюорохромом, т. е. конъюгат. Он обычно готовится путем: выделения из иммунной сыворотки глобулиновой фракции; химического связывания глобулина с флюорохромом, чаще всего, изотиоцианатом флюоресцеина; и отделения конъюгата из смеси колоночной хроматографией.

Последнее время стандартные конъюгаты, содержащие антитела к тканевым, микробным и вирусным антигенам, в широком выборе предлагаются различными коммерческими предприятиями. В лиофилизированном виде они достаточно стабильны и могут использоваться длительное время. Перед обработкой конъюгатами ткани, в которых предполагается наличие искомого антигена, фиксируются ацетоном (возможно также этиловым спиртом, формалином), что делает оболочки клеток проницаемыми для конъюгата.

Существуют две модификации МФА: при т. н. прямом методе используются флюоресцирующие антитела, специфические в отношении искомого антигена; непрямой МФА предполагает на первом этапе взаимодействие антигена с немеченой иммунной сывороткой, а на втором — присоединение к связавшимся антителам конъюгата, содержащего антивидовые антитела, специфические в отношении глобулинов животного, использованного для приготовления иммунной сыворотки к искомому антигену. При непрямом МФА один и тот же конъюгат можно использовать при поиске разных антигенов.

К достоинствам МФА относят возможность его использования для определения морфологической локализации антигена; недостатком считается трудность установления каких-либо количественных параметров теста. МФА нашел применение в исследованиях по вирусным гепатитам, особенно часто к его помощи прибегали при разработке лабораторных моделей и в опытах по культивированию вирусов гепатитов в клеточных системах IN VITRO. В некоторых случаях МФА успешно использовался как иммуногистохимический метод при обследовании биоптатов печени для подтверждения этиологического диагноза.

Благодаря умелому применению МФА был впервые обнаружен и идентифицирован в качестве самостоятельного агента вирус гепатита D.

 

---

Реклама: